División celular y crecimiento. Respuesta a estímulos abióticos

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PROTOCOLO PARA LA TRANSFORMACION  GENETICA DE TOMATE:
Dr. Laura Carillo.

En nuestro grupo estamos interesados en la búsqueda y caracterización de factores de transcripción relacionados con la tolerancia a distintos estreses abióticos. Estos factores transcripcionales constituyen una importante herramienta biotecnológica para la mejora genética de especies de interés agronómico.

En este sentido hemos puesto a punto un método de transformación genética de tomate (Solanum lycopersicum L.), en concreto de la variedad comercial Money Maker. El tomate es una de las especies hortícolas de mayor importancia y tiene un ciclo de vida relativamente corto, por lo que resulta ser un modelo interesante para el estudio funcional de genes de interés.

La transformación está mediada por Agrobacterium tumefaciens cepa LB4404, previamente transformada con un plásmido binario que porta el gen de interés. Los explantes se obtienen a partir de cotiledones de 12 días que previamente a la infección se preparan manteniéndolos en oscuridad durante 2 días. La infección se realiza con un co-cultivo de los explantes y A. tumefaciens en medio liquido durante 20 minutos. Pasado este tiempo se vuelven a incubar en oscuridad durante 3 días y posteriormente se realiza un lavado para eliminar restos de A.tumefaciens que pudieran quedar en el tejido vegetal. A partir de este momento comenzará la regeneración de plantas completas.

El proceso de regeneración está basado en el uso de distintas hormonas y vitaminas que se añadirán al medio de cultivo, primero para obtener callos y brotes y posteriormente raíces. Además, se añadirá al medio el antibiótico correspondiente para realizar una selección de las células transformadas. Una vez que estén formadas las raíces, las plantas  se pasarán a tierra y se llevarán al invernadero para posteriormente proceder a los análisis moleculares correspondientes.

Transformación genética de tomate